益气活血通络解毒方对肺缺血/再灌注损伤小鼠细胞凋亡及c-Jun氨基末端激酶通路的影响

摘要：目的 观察益气活血通络解毒方(YHTJF)对小鼠肺缺血/再灌注(I/R)损伤(LIRI)的影响,并探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)是否参与其凋亡机制.方法 选择雄性C57BL/6J小鼠70只,按随机数字表法分为正常对照组(C组)、羧甲基纤维素钠(CMC-Na)+正常对照组(CMC-Na+C组)、CMC-Na+假手术组(CMC-Na+S组)、CMC-Na+I/R模型组和CMC-Na+YHTJF低、中、高浓度干预组(CMC-Na+YL组、CMC-Na+YM组、CMC-Na+YH组).C组不进行任何处理;CMC-Na+S组只开胸,不夹闭肺门;其余各组均开胸夹闭肺门30 min,再松开动脉夹使左肺再灌注3h.术毕处死小鼠留取肺组织,光镜和电镜下观察肺组织形态学及超微结构改变,并观察肺泡损伤定量评估指标(IQA)的变化;用原位末端缺刻标记试验(TUNEL)检测肺组织细胞凋亡指数(AI);用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)和反转录-聚酶链反应(RT-PCR)检测JNK、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的mRNA和蛋白表达;并分析肺组织AI与JNK、GRP78的mRNA和蛋白表达及IQA的相关性.结果 CMC-Na+I/R组IQA、AI及JNK和GRP78 mRNA和蛋白表达均较CMC-Na+S组明显升高[IQA:(74.00±7.31)％比(7.00±1.23)％,AI:(64.40±11.97)％比(5.60±1.14)％,JNK mRNA(灰度值):1.143±0.284比0.152±0.128,GRP78 mRNA(灰度值):0.897±0.129比0.284±0.044,JNK蛋白(A值):0.428±0.074比0.073±0.052,GRP78蛋 白(A值):1.075±0.145比0.589±0.060],CMC-Na+YL组、CMC-Na+YM组、CMC-Na+YH组IQA、AI、JNK mRNA和蛋白、GRP 78 mRNA表达均较CMC-Na+I/R组明显下降,以CMC-Na+YM组较CMC-Na+YL和CMC-Na+YH组下降程度更显著[IQA:(26.20±3.35)％比(34.00±5.34)％、(41.20±9.18)％,AI:(29.40±3.05)％比(48.20±3.83)％、(39.20±6.14)％,JNK mRNA(灰度值):0.681±0.130比0.804±0.153、0.938±0.11,GRP78 mRNA(灰度值):0.450±0.105比0.747±0.231、0.566±0.115,JNK蛋白(A值):0.188±0.049比0.261±0.065、0.209±0.063,均P＜0.01],CMC-Na+YH组、CMC-Na+YL组和CMC-Na+YM组GRP78蛋白表达较CMC-Na+I/R组明显升高,以CMC-Na+YH组升高程度较CMC-Na+YL组和CMC-Na+YM组更显著(A值:1.429±0.226比1.130±0.169、1.128±0.177,均P＜0.01).光镜下可见各组细胞凋亡以肺血管内皮细胞、肺泡上皮细胞为主,棕色颗粒为阳性细胞.电镜下可见:CMC-Na+I/R组细胞核固缩并边集在核膜下,胞质浓缩,板层体减少、排空增多,细胞膜上微绒毛减少或消失,线粒体肿胀,肺泡隔及毛细血管内炎性细胞附壁增多.与CMC-Na+I/R组比较,CMC-Na+YL组、CMC-Na+YM组、CMC-Na+YH组肺组织超微结构损伤减轻,肺泡结构超微结构清晰可辨,核染色质较均匀,胞质增多,Ⅱ型肺泡上皮细胞表面微绒毛较多,板层小体数量增多,线粒体肿胀减轻,以CMC-Na+YM组减轻明显.肺组织AI与JNK、GRP78的mRNA和蛋白表达、IQA均呈显著正相关性(r值分别为0.907、0.928、0.880、0.712、0.911,均P＜0.01).结论 YHTJF可有效减轻小鼠LIRI肺组织细胞的凋亡,其机制可能与抑制JNK通路有关.